Ларионов С. В., Почепня Е. С., Агольцов В. А., Черных О. Ю., Бирюкова О. П., Падило Л. П. Результаты сравнительных диагностических исследований крови и молока на лейкоз, с использованием РИД и ПЦР // Научная жизнь. 2023. Т. 18. Вып. 5 (131)

Ларионов Сергей Васильевич, чл.-корр. РАН, д-р ветеринар. наук, профессор, профессор кафедры «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина зд. 4, стр. 3.
Почепня Екатерина Сергеевна, аспирант кафедры «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина зд. 4, стр. 3.
Агольцов Валерий Александрович, д-р ветеринар. наук, профессор, профессор кафедры «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.
Черных Олег Юрьевич, д-р ветеринар. наук, профессор, директор ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»: Россия, 352380, Краснодарский край, г. Кропоткин, ул. Красноармейская, 303.
Бирюкова Оксана Петровна, канд. ветеринар. наук, доцент, доцент кафедры «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.
Падило Лариса Павловна, канд. биол. наук, доцент кафедры «Болезни животных и ветеринарно-санитарная экспертиза», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.

Тел.: (917) 207–40–45
E-mail: Agoltsov-Saratov@yandex.ru

Целью исследования явилось обоснование применения ПЦР для проведения анализа крови и молока коров в хозяйстве неблагополучном по энзоотическому лейкозу крупного рогатого скота. При сравнении эффективности применения серологического и молекулярно-генетического методов лабораторной диагностики установлено, что более чувствительным по обнаружению инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота методом в сравнении с реакцией иммунной диффузии (РИД) является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Всего исследована 271 проба крови и 271 проба молока от коров. В РИД с пробами сыворотки крови, полученными от 271 головы крупного рогатого скота, положительные результаты (наличие антител против вируса лейкоза) выявлены в 43 пробах, которые также показали наличие провирусной ДНК и в ПЦР. Результаты РИД и ПЦР исследований сыворотки крови оказались идентичными в 38,1 % случаев. Параллельными исследованиями ПЦР-диагностикой дополнительно было выявлено 70 голов инфицированного вирусом крупного рогатого скота. В результате исследования проб крови в ПЦР с использованием тест-систем «Лейкоз» наличие провирусной ДНК вируса было выявлено в 113 из 271 исследованной пробы. ДНК возбудителя обнаруживалась как в цельной крови, так и в сыворотке, а также в ресуспензированном с забуференным физиологическим раствором кровяном сгустке и в цельном молоке от больных животных. Для исследования молока в РИД предварительно получали лактосыворотку по оригинальной (разработанной сотрудниками университета) методике. Из исследованных 271 проб молока лактосеропозитивными признано 40 коров. Исследования в РИД молочной сыворотки подтвердило результаты, полученные в РИД с сывороткой крови у 93% коров. Результаты РИД и ПЦР исследований сыворотки крови демонстрируют чувствительность ПЦР значительно превышающую чувствительность РИД, однако при анализе результатов исследований следует учитывать возрастные и физиологические показатели тестируемых животных, т.к. уровень антител и количество провирусной ДНК у них в процессе жизни может значительно варьировать.

Список литературы:

1. Миронов А. Н., Зубова Т. В., Плешков В. А. Борьба с лейкозом крупного рогатого скота на территории Кемеровской области // Инновационный конвент "Кузбасс: образование, наука, инновации": Мат. Инновац. конвента, Кемерово, 14 декабря 2018 года / Департамент молодежной политики и спорта Кемеровской области. – Кемерово: Сибирский государственный индустриальный университет, 2019. – С. 469-470.

2. Донник И. М., Пономарева О. И., Кривонос Р. А. [и др.]. Ликвидация лейкоза крупного рогатого скота в условиях промышленного производства // Ветеринария Кубани. – 2021. – № 2. – С. 3-8.
3. Макаров В. В., Лозовой Д. А. Эпизоотологические особенности современного лейкоза крупного рогатого скота // Вестник российской сельскохозяйственной науки. – 2020. – № 1. – С. 53-58.
4. Макаров В. В., Лозовой Д. А. Лейкоз крупного рогатого скота – современная концепция : лекционное пособие. – Владимир: ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», 2020. – 52 с.
5. Патент № 2700245 C1 Российская Федерация, МПК C12Q 1/68. Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV): № 2018134803: заявл. 01.10.2018: опубл. 13.09.2019 / О. Ю. Черных, В. А. Баннов, Д. В. Малышев [и др.].
6. Bartlett P. C., Ruggiero V. J., Hutchinson H. C., Droscha C. J., Norby B., Sporer K. R. B, Taxis T. M. Current Developments in the Epidemiology and Control of Enzootic Bovine Leukosis as Caused by Bovine Leukemia Virus. – Pathogens. – 2020. – Dec 18, 9 (12). – P. 1058.
7. Ruggiero V. J., Norby B., Benitez O. J., Hutchinson H., Sporer K. R. B., Droscha C., Swenson C. L., Bartlett P. C. Controlling bovine leukemia virus in dairy herds by identifying and removing cows with the highest proviral load and lymphocyte counts. – J Dairy Sci. – 2019. – Oct, 102(10). – P. 9165-9175.
8. Ruiz V., Porta N. G., Lomónaco M., Trono K., Alvarez I. Bovine Leukemia Virus Infection in Neonatal Calves. Risk Factors and Control Measures. – Front Vet Sci. – 2018. – Oct. 25, №5. – P. 267.
9. Selim A., Marawan M. A., Ali A.-F. F., et al. Seroprevalence of bovine leukemia virus in cattle, buffalo, and camel in Egypt. – Trop Anim Health Prod. – 2020. – Vol.52. – P.1207-1210.
10. Juliarena M. A., Barrios C. N., Lützelschwab C. M., Esteban E. N., Gutiérrez, S. E. Bovine leukemia virus: current perspectives // Archived Jour-nals. 10 August 2017, vol. 2017. – №9. – P. 13–26. – DOI https://doi.org/10.2147/VAAT.S113947.
11. Polat M., Takeshima S., Aida Y. Epidemiology and genetic diversity of bovine leukemia virus // Virol J. – 2017. – №14. – Р. 209-243.
12. Nekouei O., VanLeeuwen J., Sanchez J., Kelton D., Tiwari A., Keefe G. Herd-level risk factors for infection with bovine leukemia virus in Ca-nadian dairy herds // Prev Vet Med. – 2015. – №119. – Р. 105–113.

RESULTS OF COMPARATIVE DIAGNOSTIC STUDIES OF BLOOD AND MILK FOR LEUKEMIA USING RID AND PCR

Larionov Sergey Vasilyevich, Corr. Member of the RAS, Dr. of Vet. Sci., Prof., Prof. of the Depart. of Animal Diseases and Veterinary Sanitary Expertise, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Pochepnya Ekaterina Sergeevna, postgraduate of the Depart. of Animal Diseases and Veterinary Sanitary Expertise, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Agoltsov Valery Alexandrovich, Dr. of Vet. Sci., Prof., Prof. of the Depart. of Animal Diseases and Veterinary and Sanitary Expertise, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Chernykh Oleg Yuryevich, Dr. of Vet. Sci., Prof., Director of Kropotkin Regional Veterinary Laboratory, Kropotkin, Russia.
Biryukova Oksana Petrovna, Cand. of Vet. Sci., Ass. Prof., Ass. Prof. of the Depart. of Animal Diseases and Veterinary and Sanitary Expertise, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Padilo Larisa Pavlovna, Cand. of Biol. Sci., Ass. Prof. of the Depart. of Animal Diseases and Veterinary and Sanitary Expertise, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.

Keywords: bovine leukemia, laboratory diagnostics, sensitivity of the method, polymerase chain reaction, diffusion precipitation reaction.

Abstract. The purpose of the study was to substantiate the use of PCR for blood and milk analysis of cows in a farm with poor bovine enzootic leukemia. When comparing the effectiveness of serological and molecular genetic methods of laboratory diagnostics, it was found that polymerase chain reaction (PCR) is more sensitive to the detection of bovine leukemia virus infected by the method in comparison with the immune diffusion reaction (RID). A total of 271 blood samples and 271 milk samples from cows were examined. In the RID with blood serum samples obtained from 271 heads of cattle, positive results (the presence of antibodies against the leukemia virus) were detected in 43 samples, which also showed the presence of proviral DNA in PCR. The results of REED and PCR studies of blood serum were identical in 38.1% of cases. Parallel studies of PCR diagnostics additionally revealed 70 heads of cattle infected with the virus. As a result of the study of blood samples in PCR using the Leukosis test systems, the presence of proviral DNA of the virus was detected in 113 of the 271 samples studied. The DNA of the pathogen was found in both whole blood and serum, as well as in a blood clot resuspended with buffered saline solution and in whole milk from sick animals. For the study of milk in REED, lactoserum was previously obtained according to the original (developed by university staff) methodology. Of the 271 milk samples studied, 40 cows were found to be lactoseropositive. Studies in RID of whey confirmed the results obtained in RID with blood serum in 93% of cows. The results of REED and PCR studies of blood serum demonstrate a sensitivity of PCR significantly exceeding the sensitivity of REED, however, when analyzing the results of studies, the age and physiological parameters of the tested animals should be taken into account, since the level of antibodies and the amount of proviral DNA in their lifetime can vary significantly.