Кузнецов М. А. , Щербаков А. А. , Иващенко С. В., Скорляков В. М. Получение и оценка специфичности диагностической сыворотки для выявления сосудистого бактериоза крестоцветных // Научная жизнь. 2022. Т. 17. Вып. 6.

Кузнецов Михаил Андреевич, аспирант кафедры «Микробиология, биотехнология и химия», ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, Саратовская обл., г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.
Щербаков Анатолий Анисимович, д-р биол. наук, профессор, ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, Саратовская обл., г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.
Иващенко Сергей Владимирович, канд. биол. наук, доцент, ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, Саратовская обл., г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.
Скорляков Виктор Михайлович, д-р ветеринар. наук, профессор, ФГБОУ ВО «Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии им. Н. И. Вавилова»: Россия, 410012, Саратовская обл., г. Саратов, пр-кт им. Петра Столыпина, зд. 4, стр. 3.

Тел.: (917) 318-99-44
E-mail: scherbakov.2014@yandex.ru

Сосудистый бактериоз крестоцветных является опасным заболеванием сельскохозяйственных культур. Он вызывает массовую гибель растений в поле, значительные потери урожая и способствует его порче в период хранения, особенно – из-за поражения другими инфекциями, сопровождающими его развитие. Эффективные методы борьбы с его возбудителем отсутствуют, поэтому важным условием снижения заражённости крестоцветных данной инфекцией являются её своевременное выявление и профилактика распространения заражения. На сегодняшний день, эта проблема, связанная с анализом большого количества образцов, наиболее эффективно решается методами иммуноанализа, для успешной практической реализации которых необходима специфическая к выявляемому возбудителю гипериммунная сыворотка. Созданию такой сыворотки посвящена представленная работа. Её получение проводилось иммунизацией кроликов препаратом дезинтегрированных мембран клеток возбудителя сосудистого бактериоза крестоцветных – Xanthomonas campestris – с применением в качестве адъюванта 0,05%-го раствора полиазолидинаммония, модифицированного гидрат-ионами галогенов. В результате было установлено, что полученная сыворотка является высокоспецифичной по отношению к выявляемому патогену. Использование при её создании названного адъюванта позволило достичь уровня чувствительности, достаточного для исключения влияния на ход анализа микроорганизмов других родов и видов, широко распространённых в дикой природе. Это позволяет эффективно использовать сыворотку в диагностических системах. Благодаря использованию другого адьюванта, удалось добиться сокращения времени, необходимого для иммунизации кроликов. Это позволяет получать большие объёмы сыворотки в более короткие сроки, что делает проведение анализа более доступным и позволяет шире использовать его в повседневной практике.

Список литературы:

1. Габор Б., Као Дж., Краузе Д. Руководство по болезням крестоцветных. Практическое пособие для семеноводов, овощеводов и консультантов по сельскому хозяйству. – Seminis, 2013. – 52 c.

2. Лазарев А. М., Мысник Е. Н., Игнатов А. Н. Ареал и зона вредоносности сосудистого бактериоза капусты // Вестник защиты растений – 2017. – № 1 (19) – С. 52-55
3. Лазарев А. М., Рогачев Ю. Б. Бактериальные болезни капусты и меры борьбы с ними / Методические рекомендации. – СПб.: ГНУ ВИЗР, 2004. – 56 с.
4. Сильванович Н. А. Сосудистый бактериоз капусты и пути снижения его вредоносности: автореф. … дис. канд. биол. наук : 06.01.11 / Сильванович Николай Андреевич. – п. Самохваловичи, Минской области. – 2000. – 21 с.
5. Мазурин Е. С., Джалилов Ф. С., Игнатов А. Н., Варицев Ю. А. Усовершенствование диагностики заражённости семян капусты возбудителем сосудистого бактериоза методом иммуноферментного анализа // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. – 2009. – № 1. – С. 66-72.
6. Мазурин Е. С. Методы диагностики возбудителя сосудистого бактериоза капусты и меры защиты: автореф. … дис. канд. биол. наук: 06.01.11 / Мазурин Евгений Сергеевич. – Москва, 2009. – 22 с.
7. Рысмухамбетова Г. Е. Экзополисахариды ксантомонад и клебсиелл: физико-химические, биологические свойства и перспективы применения: автореф. … дис. канд. биол. наук (03.00.07, 03.00.23) / Рысмухамбетова Гульсара Есенгильдиевна; Саратовский ГАУ им. Н. И. Вавилова. – Саратов, 2007. – 151 с.
8. Sato T., Ito K., Yura T.: Eur. // J. Biochem. – 1977. – Vol. 78. –
Pp. 557-567.
9. Miruno T., Kageyama M. // J. Biocem, – 1979. – Vol. 85. – P. 115-122.
10. Иващенко С. В. Применение мембранных белков в диагностике иерсиниозов // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н. И. Вавилова. – 2013. – № 2. – С. 17-18.
11. Lowry O. H. , Rosebrough N. J. , Farr A. L. , Randall R. J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. – 1951. – Vol. 193, № 1. – Pp. 265-275.
12. Hornbeck P. Enzyme-linked immunosorbent assays // Current Protocols in Immunology. – 1991. – Pp. 2.1.2-2.1.22.

OBTAINING AND EVALUATING THE SPECIFICITY OF DIAGNOSTIC SERUM FOR THE DETECTION OF VASCULAR BACTERIOSIS OF CRUCIFEROUS

Kuznetsov Mikhail Andreevich, Postgraduate student of the Depart. of Microbiology, Biotechnology and Chemistry, Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N. I. Vavilov, Saratov, Russia.
Shcherbakov Anatoly Anisimovich, Dr. of Biol. Sci., Prof., Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Ivashchenko Sergey Vladimirovich, Cand. of Biol. Sci., Ass. Prof., Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.
Skorlyakov Viktor Mikhailovich, Dr. of Vet. Sci., Prof., Saratov State University of Genetics, Biotechnology and Engineering named after N.I. Vavilov, Saratov, Russia.

Keywords: Xanthomonas campestris, vascular bacteriosis, cruciferous, diagnostics, serum, immunoanalysis, disintegrated membranes, antibodies, adjuvant, polyazolidinammonium.

Abstract. Vascular bacteriosis of cruciferous is a dangerous disease of agricultural crops. It causes mass death of plants in the field, significant crop losses and contributes to its spoilage during storage, especially due to damage by other infections accompanying its development. There are no effective methods of combating its pathogen, therefore, an important condition for reducing the infection of cruciferous plants with this infection is its timely detection and prevention of the spread of infection. To date, this problem associated with the analysis of a large number of samples is most effectively solved by immunoassay methods, for the successful practical implementation of which a hyperimmune serum specific to the detected pathogen is necessary. The presented work is devoted to the creation of such a serum. Its preparation was carried out by immunization of rabbits with a preparation of disintegrated cell membranes of the causative agent of vascular bacteriosis of cruciferous – Xanthomonas campestris – using a 0.05% solution of polyazolidinammonium modified with hydrate ions of halogens as an adjuvant. As a result, it was found that the obtained serum is highly specific in relation to the detected pathogen. The use of the named adjuvant in its creation made it possible to achieve a level of sensitivity sufficient to exclude the influence on the analysis of microorganisms of other genera and species widely distributed in the wild. This makes it possible to use the serum effectively in diagnostic systems. Thanks to the use of another adjuvant, it was possible to reduce the time required for immunization of rabbits. This makes it possible to obtain large volumes of serum in a shorter time, which makes the analysis more accessible and allows it to be used more widely in everyday practice.